对少弱精子症患者的抗氧化作用
观察健脾益肾法(续断种子方)对少弱精子症患者的抗氧化作用及临床疗效。方法：120例患者按随机数字表法分为2组，治疗组60例采用续断种子方治疗，对照组60例采用左卡尼汀口服液治疗，疗程均为3个月。结果：治疗组临床总有效率为85.9％，女方妊娠6例;对照组临床总有效率为71.9％，女方妊娠4例，治疗组的临床疗效明显优于对照组(P<0.05)。
两组患者比较治疗后精浆MDA 含量和SOD 活力测定结果差异无统计学意义;治疗组精子浓度、a+b级精子和精子活率治疗后提高幅度优于对照组(P<0.05)。结论：健脾益肾法(续断种子方) 能增强精子的抗氧化作用,提高临床疗效。
少弱精子症;健脾益肾法;续断种子方;中医药疗法
少弱精子症是男性不育的常见原因，活性氧(reactive oxygen species，ROS)既与精子高活跃性运动、获能以及顶体反应等生理功能有关，也与精子活力降低及DNA 氧化损伤等病理作用有联系[1]。我们采用健脾益肾法(续断种子方)治疗少弱精子症取得较好的临床疗效，现进一步观察其抗氧化作用，以期揭示续断种子方治疗少弱精子症的可能作用机理。
1 、一般资料
1.1病例来源
所纳病例来源于2011年3月-2012年2月广西中医药大学第一附属医院男科门诊的病人。年龄22-50岁，平均31.1岁，病程1-5年，平均1.7年，治疗前2组患者年龄、病程经统计学处理，差异无显著性意义(P>0.05)，具有可比性。
1.2西医诊断标准
根据WHO《不育夫妇标准检查诊断手册》[2]，婚后未避孕而不育12 个月以上，性生活正常。精液分析：依据WHO 标准[2]：精子密度≤20×106/ml，a级活动精子<25％或a+b级活动精子<50％。
1.3脾肾两虚证中医辨证标准：
参照中华人民共和国卫生部关于中药新药临床研究指导原则[3],主要症状表现为：头晕耳鸣，健忘脱发;腰膝酸软、目眶黧黑、纳差便溏、神疲乏力、夜尿频多、性功能欠佳;舌质淡胖或有齿痕，脉沉细弱。
1.4排除标准
①无精子症和睾丸发育不良;②精索静脉曲张II°以上;③同时在服用抗癫痫、抗肿瘤等有碍生精功能及影响精子活力的药物。
1.5治疗方法：
治疗组给予续断种子方(经验方,组成：菟丝子20g、枸杞子10g、女贞子10g、骨碎补15g、杜仲15g、续断20g、党参15g、白术10g、山药15g、大枣15g、茯苓15g、萆Z15g、牛膝15g)，采用单味中药配方颗粒(免煎中药，由江苏省江阴市天江药业有限公司生产);对照组给予左卡尼汀口服液口服(东北制药总厂生产，国药准字H19990372)用法：1g/次，3次/日，连续用药3个月。两组均以3个月为 1 疗程， 连续治疗1个疗程。
1.6标本采集及检测方法
所有受检者要求检查前2～7天无排精史。自行手法刺激采集1次射出的全部精液于清洁干燥取精杯内，置37℃恒温水浴箱内观察液化待检。检测方法：采用计算机辅助精液分析(CASA)技术(郑州伟力精子质量检测系统软件)作全套相关分析。余下的精液以3 000 r/ min 离心15 min 分离出精浆。精浆SOD检测用黄嘌呤氧化法，MDA检测采用硫代巴比妥法，按试剂盒说明书步骤进行测试。
1.7观察指标
治疗前、治疗后三个月查精子质量计算机分析，观察临床症状改善情况及精子参数的变化,进行精浆MDA 含量和SOD 活力测定。
1.8 统计学方法
采用SPSS13.0统计软件进行统计，计量资料常用t检验，方差分析来进行数据分析，以P <0.05为差异有统计学意义。
2 、疗效判定标准与结果
参照WHO《不育夫妇标准检查与诊断手册》并参照《中药新药临床研究指导原则》[3]中有关疗效标准结合临床实际情况进行修订。临床治疗：女方怀孕或精子密度、活动力等恢复正常;有效：精子检测虽不正常，但精子活率及a 级或a + b级活力精子提升≥50％，少精症治疗后精子密度提升≥20×106/ml;无效：未达以上标准者。
3 、结果
治疗组3例因外出或接受辅助生殖脱落，3例患者在治疗期间配偶怀孕作为完成病例;对照组外出或接受辅助生殖3例患者脱落。实际可评价病例114例，对照组57例,治疗组57例。
3.1临床总疗效评价
对照组57例患者治疗16例，有效25例，无效16例，女方妊娠3例，临床总有效率71.9％;治疗组57例患者治疗23例，有效26例，无效8例，女方妊娠6例，临床总有效率85.9％。治疗3个月后治疗组与对照组比较，治疗组的总有效率明显高于对照组有统计学意义(P<0.05)。
3.2精浆MDA 含量和SOD 活力测定结果
两组患者治疗前、治疗3个月后精浆MDA 含量和SOD 活力测定结果见表1。
3.3精子浓度、精子活动力、活率、正常形态率比较
治疗组精子浓度、a+b级精子和精子活率治疗后提高幅度优于对照组(P<0.05)，正常形态率两组比较无统计学意义(见表2)。
3.4性激素六项改变情况
两组性激素六项即卵泡生成激素(FSH)、黄体生成激素(LH)、雌二醇 (E2)、孕酮(P)、睾酮(T)、垂体泌乳素(PRL)治疗前后变化无统计学意义(P>0.05)。
3.5随访情况
两组患者均随访3个月，治疗组女方妊娠6例;对照组女方妊娠3例，1例出现女方妊娠52天后胎儿停止发育流产，精液分析男方为畸形精子症。
4、 讨论
少弱精子症是男性不育症的常见原因，欧洲生殖学会指出男性不育可能由于多种因素造成，如长期应激环境因素引起内分泌紊乱、活性氧和基因缺陷等[4,5]。
研究证实活性氧(reactive oxygen species，ROS) 产生过多是造成男性弱精子症的重要病因之一。ROS 主要通过3 种途径导致不育: 抑制ATP的生成及精子的运动;产生脂质过氧化物, 损害精子细胞膜、精子细胞的超微结构;破坏精子DNA [5,6]。正常情况下，由于生殖系统内(如附睾)和精子自身具有的抗氧化物和抗氧化酶类的保护作用以及精液射出体外后精浆中富含的抗氧化物和抗氧化酶的存在，使 ROS的产生和清除处于一种平衡状态;当 ROS产生超出上述抗氧化系统的清除能力时，则会攻击精子，对精子及生物大分子产生各种毒性作用，出现自由基生物学中称谓的氧化应激(oxidative stress)。
精子脂质过氧化反应产物――丙二醛(MDA)，MDA作为活性氧与细胞多不饱和脂肪酸发生过氧化反应的主要产物，是脂质过氧化损伤严重程度的指标,通过检测丙二醛可了解活性氧的浓度[6]。临床多采用左卡尼汀口服液、维生素E和维生素C等抗氧化剂治疗男性少、弱精子症，亦有报道中药能够增强体内抗氧化酶活性，改善附睾功能，较终保护精子免受氧化损伤。
传统医学认为，少弱精子症属于中医“精少”、“精清”、“精冷”范畴。我们认为少弱精子症以肾虚为主，与肝、脾等脏有关，兼夹湿热、肝郁、血瘀等，治疗主张健脾益肾为根本大法。脾为后天之本, 主运化水谷精微, 为气血生化之源。脾胃健则气血充, 生精有源, 种子有望。健运脾胃, 补益后天, 水谷精微而能聚精归肾, 精旺则子盛。临床亦以脾肾两虚、气血不足患者常见。因此，我们确立了“脾肾两虚”为少弱精子症的基本病理，并以健脾益肾法为指导组成中药验方“续断种子方”治疗少弱精子症[7,8]。
由菟丝子、枸杞子、女贞子、续断、骨碎补、杜仲、党参、白术、山药、大枣等组成，具有健脾益肾，益气生精之功效。现代药理研究证实，菟丝子所含黄酮类物质有类雌激素样作用，对生殖系统具有清除自由基、抗氧化的作用，提高机体免疫力的药理作用;枸杞子成分主要含枸杞多糖具有增强免疫调节功能;女贞子主要含有女贞子甙、齐墩果酸、右旋甘露醇及微量元素Zn，对机体的生长发育及免疫系统免疫起着重要的作用。续断、杜仲有降低组织呼吸作用的基础代谢，提高氧利用率，减少自由基对机体的损伤。
我们前期的临床观察表明与黄精赞育胶囊比较，“续断种子方”治疗男性不育症具有较好疗效，患者精子活力和活率提高幅度优于黄精赞育胶囊组，本研究中续断种子方能增强精子的抗氧化作用,提高临床疗效。
